《玩具总动员2》围绕牛仔胡迪的身份危机展开核心剧情：
开头胡迪因手臂脱线被安迪暂时搁置阁楼，却被玩具收藏家艾尔意外偷走——原来胡迪是20世纪50年代经典牛仔秀《胡迪的冒险》的原型玩偶，属于稀有收藏品，艾尔计划将他与同系列伙伴（女牛仔翠丝、矿工皮特、小胖猪火腿等）卖给日本博物馆。
巴斯光年得知胡迪被拐后，带领弹簧狗、翠丝等玩具踏上救援之路。途中巴斯偶遇自己的“克隆款”巴斯，既了解到胡迪作为收藏品的珍贵性，也发现翠丝的腿因年久失修已无法正常活动。
胡迪在艾尔仓库中恢复部分记忆：既渴望回到安迪身边，又因不愿抛弃受伤的翠丝而犹豫。当他看到仓库里堆积的被遗弃玩具，更意识到安迪终将长大，玩具命运或许难逃遗忘。但最终，胡迪说服巴斯带上翠丝和同伴，凭借克隆巴斯的帮助，成功从行李箱逃脱，回到安迪家。
安迪修好翠丝的腿，玩具们再次团聚——胡迪明白：即使未来被遗忘，此刻与安迪的陪伴才是最珍贵的。
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